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Les emblèmes et monogrammes du roi – l'épée de feu- et de la reine Anne de Bretagne17 (1477/ 1491-1498/ 1499-1514)- l'hermine–, présents dans les pièces du château, attestent de la présence du couple royal.

Mais la mort prématurée de Charles VIII, à 28 ans, l'empêche de voir achevé son grand projet.

Charles VIII étant décédé sans héritier mâle, son cousin, le duc d'Orléans, lui succède sous le nom de Louis XII (1462- 1498-1515). Afin de conserver le duché de Bretagne dans le giron français, ce dernier doit épouser la veuve du roi défunt. Ainsi, Anne de Bretagne (1477/1491-1498/ 1499-1514) devient la seule femme de l’Histoire de France à porter à deux reprises le titre de reine.

Le nouveau roi réside principalement en son fief de Blois tandis que son jeune cousin et héritier présomptif, François de Valois-Angoulême, le futur François I^er, est éduqué à Amboise.

Louis XII poursuit les travaux initiés par son prédécesseur et fait achever la Tour Heurtault dans l'aile perpendiculaire au Logis de son prédécesseur.

Après son enfance au château et avènement, le 1^er janvier 1515, François 1^er(1494- 1515-1547) quitte la France pour l’Italie et remporte la bataille de Marignan en septembre de la même année. Il n’en oublie pas pour autant Amboise qu’il fait embellir : il rehausse l'aile Louis XII du Château et fait décorer les lucarnes selon le « goût italien».

La fascination de François 1er pour les lettres et les arts en fait un grand souverain mécène de la Renaissance. Il convie ainsi de nombreux artistes notamment transalpins à Amboise, à l’exemple de Léonard de Vinci (1452-1519) qui y séjourne de 1516 à 1519.

Henri II (1519- 1547- 1559), fils de François Ier, est quant à lui à l'origine de l'édification d'un bâtiment parallèle à l'aile Louis XII (aujourd'hui disparu) qu’il fait aménager pour les appartements des enfants de France. Après sa mort, Catherine de Médicis (1519-1589), son épouse, assure la régence du royaume.